Transwell

       Transwell小室底层有一张有通透性的膜（通常为聚碳酸酯膜），将其放置于孔板中，小室内称上室，培养板内称下室。将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。 应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。

应用领域

1. 细胞共培养：小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径规格

a）在下室中接种能够分泌细胞因子或特定蛋白产物的细胞B，在上室中接种效应细胞A；

b）按照实验要求培养一定的时间后，通过流式等方法检测研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响

2. 趋化实验：可选5.0、8.0、12.0µm膜，上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室

a）在上室中接种效应细胞，下室中接种能够分泌特定产物的细胞或加入因子

b）计数进入下室的细胞数可反映分泌产物或因子对特定细胞的趋化作用

3. 细胞迁移实验：常选用8.0、12.0µm膜

a）在上室中接种效应细胞，下室中加入待测样品

b）计数进入下室的细胞量，可评价该样品对细胞迁移能力的影响

4. 肿瘤细胞侵袭实验：常用8.0、12.0µm膜

膜原理与细胞迁移实验类似，上室接种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，但与细胞迁移实验不同的是，聚碳酸酯膜上室需铺上一层基质胶，用以模仿体内细胞外基质，细胞欲进入下室，先要分泌基质金属蛋白酶（MMPs）将基质胶降解，方可通过聚碳酸酯膜。计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的侵袭能力

实验流程:

1、消化细胞并计数，6孔板每孔铺入约1.6x106个细胞，使用完全培养基，于

细胞培养箱中过夜培养。

2、更换新鲜培养基，每孔中转染质粒/转染SiRNA/加药处理，过夜培养后更

换新鲜培养基

3、细胞培养xh时，在Transwell chamber上室及下室中分别加入500μL无

血清的RPMI-1640培养基,于细胞培养箱中孵育2h，用于水化包被基底膜。

4、按冻存细胞的步骤收集细胞，弃上清后用PBS吹吸洗涤一次并离心，1500

rpm离心5 min。

5、分别用含无血清的培养基重悬细胞，并进行计数。

6、再分别用无血清培养基稀释细胞悬液，使悬液中的细胞数稀释为3x105/mL。

7、在Transwell 侵袭上室内加入500μL的细胞悬液，下室内加入750μL含完

全培养基培养基，于细胞培养箱中培养22h。

8、用预冷的PBS溶液漂洗上室2次。

9、使用棉签擦去上室内的基底膜，以移除未穿膜的细胞。

10、向上室和下室内分别加入200uL甲醇，并于室温下固定10min。

11、弃去甲醇，再向上室内加入200μL 0.1%结晶紫溶液，室温染色10 min。

12、用预冷的PBS溶液漂洗上室2次。

13、在同一小室上取5个视野进行照相，并计数。

客户提供

1. 提供检测样本的样本信息、检测应用及检测时间点等；

2. 提供待检测细胞。

结果交付

1, 验原始电子图片；100 ×或200×或400x，每个样本提供3张；

2,详细实验报告（含所需试剂耗材、仪器设备、操作过程等）。