实验流程:

1、取适量细胞铺孔板，过夜培养后转染质粒/转染SIRNA/加药处理

2、转染48H后/加药处理XXH/天后

3、消化细胞后取5X105细胞1200RPM 5MIN离心，弃去上清(细胞团绿豆大

小)

4、加入1ML PBS重悬细胞，再次1200RPM5MIN离心，弃去上清

5、加300UL PBS重悬细胞，并将该细胞悬液缓缓加入700UL预冷的无水乙醇

中(边加边混匀)终浓度为70%乙醇

6、将细胞悬液置于4℃固定过夜，可4度保存，-20可保存更长时间

7、4℃运输

(流式周期检测的细胞在固定、洗涤过程中数量会出现损失，请尽量准备足量

细胞样品)

8、2000rpm 5min离心，弃去上清后加1mLPBS重悬细胞，室温放置15min

9、2000rpm 5min离心，弃去上清，加100uL RNase A充分重悬细胞，然后

于37C水浴30min再加入400uL PI并充分混匀，4℃避光30min

10、上机检测，红色荧光

送样运输要求:

1、活细胞邮寄(1*10^6个/样)

(1)用T25培养瓶培养细胞，处理后用完全培养基灌满T25培养瓶，留少许空气。

(2)瓶口与盖过火，拧紧，并用封口膜将瓶盖与瓶口结合处封起来，同时封瓶

盖。

(3)将细胞用防震材料(如泡沫)固定培养瓶，常温邮寄。

注:如果是武汉本地样品，则可将6孔板细胞带培养基冰上运输

2、冷冻细胞带六孔板直接邮寄(1*10^6个/样)

弃去培养基，尽量迅速吸干细胞培养皿/孔板/瓶中液体，-80℃速冻后干冰运

输，冷冻细胞带六孔板直接邮寄

3、冷冻细胞邮寄(1*10^6个/样)

弃去培养基，尽量迅速吸干细胞培养皿/孔板/瓶中液体，PBS润洗后胰酶消化

3MIN,加等体积的含血清完全培养基终止消化，离心去上清，只要细胞团，-80

℃速冻后干冰运输。