实验流程:

1.JC-1染色工作液的配制:

六孔板每孔所需JC-1染色工作液的量为1ML，其它培养器皿的JC-1染色工作

液的用量以此类推;对于细胞悬液每50-100万细胞需0.5MLJC-1染色工作液。

取适量JC-1(200X)，按照每50MLJC-1(200X)加入8ML超纯水的比例稀释JC

-1。剧烈VORTEX充分溶解并混匀JC-1。然后再加入2MLJC-1染色缓冲液(5X)，

混匀后即为JC-1染色工作液。

2.对于悬浮细胞:

a.取10-60万细胞，重悬于0.5ml细胞培养液中，细胞培养液中可以含血清

和酚红。

b.加入0.5mlJC-1染色工作液，颠倒数次混匀。细胞培养箱中37°C孵育20

分钟。

c.在孵育期间，按照每1mlJC-1染色缓冲液(5X)加入4ml蒸馏水的比例，配

制适量的JC-1染色缓冲液(1X)，并放置于冰浴。

d.37°C孵育结束后，600g4°C离心3-4分钟，沉淀细胞。弃上清，注意尽

量不要吸除细胞。

e.用JC-1染色缓冲液(1X)洗涤2次:加入1mlJC-1染色缓冲液(1X)重悬细胞，

600g 4°C离心3-4分钟，沉淀细胞，弃上清。再加入1mlJC-1染色缓冲液(1X)

重悬细胞，600g4°C离心3-4分钟，沉淀细胞，弃上清。

f.再用适量JC-1染色缓冲液(1X)重悬后，用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜

观察，也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。

3、对于贴壁细胞:

注意:对于贴壁细胞，如果希望采用流式细胞仪检测，可以先收集细胞，重

悬后参考悬浮细胞的检测方法。

a.对于六孔板的一个孔，吸除培养液，根据具体实验如有必要可以用PBS或

其它适当溶液洗涤细胞一次，加入1ml细胞培养液。细胞培养液中可以含有血

清和酚红。

b.加入1mlJC-1染色工作液，充分混匀。细胞培养箱中37°C孵育20分钟。

C.在孵育期间，按照每1mlJC-1染色缓冲液(5X)加入4ml蒸馏水的比例，配

制适量的JC-1染色缓冲液(1X)，并放置于冰浴。

d.37°C孵育结束后，吸除上清，用JC-1染色缓冲液(1X)洗涤2次。

e.加入2ml细胞培养液，培养液中可以含有血清和酚红。

f.荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察。

送样运输要求:

1、活细胞邮寄(1*10^6个/样)

(1)用T25培养瓶培养细胞，处理后用完全培养基灌满T25培养瓶，留少许空气。

(2)瓶口与盖过火，拧紧，并用封口膜将瓶盖与瓶口结合处封起来，同时封瓶

盖。

(3)将细胞用防震材料(如泡沫)固定培养瓶，常温邮寄。

注:如果是武汉本地样品，则可将6孔板细胞带培养基冰上运输

2、冷冻细胞带六孔板直接邮寄(1*10^6个/样)

弃去培养基，尽量迅速吸干细胞培养皿/孔板/瓶中液体，-80℃速冻后干冰运

输，冷冻细胞带六孔板直接邮寄

3、冷冻细胞邮寄(1*10^6个/样)

弃去培养基，尽量迅速吸干细胞培养皿/孔板/瓶中液体，PBS润洗后胰酶消化

3MIN,加等体积的含血清完全培养基终止消化，离心去上清，只要细胞团，-80

℃速冻后干冰运输。